提取心肌組織細胞内線粒體的方案

  提取新鮮心肌組織細胞内線粒體的方案：

  心肌組織切碎後(hòu)在4 ℃介質（0.25mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4，0-4℃）中制備心肌組織勻漿。勻漿經(jīng)750g、離心10 min後(hòu)留上清，以9000 g離心20min 後(hòu)留沉澱，重新懸浮後(hòu)以9000 g再離心20 min，棄上清得線粒體.全部操作于4 ℃進(jìn)行。
培養細胞提取線粒體.細胞棄去培養液後(hòu)，用細胞收集液作用2到3 min，用scraper,將(jiāng)細胞收集起(qǐ)來，6000 g離心15 min。棄上清，之後(hòu)加細胞勻漿液，用勻漿器或手動勻漿管勻漿，將(jiāng)裝有勻漿液的離心管配平後(hòu)放入普通離心機，以2500 rpm，離心15 min,緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中.以17000 rpm離心20 min，棄上清，留取沉澱物。加入0．25mol/L蔗糖與0．003 mol/L氯化鈣液l ml，用吸管吹打成(chéng)懸液，以17000 rpm離心20 min，將(jiāng)上清吸入另一試管中，留取沉澱物，加入0.1ml 0．25mol/L蔗糖與0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成(chéng)懸液.即得線粒體。